Xét nghiệm LPA là gì? Nó có ưu điểm gì so với các phương pháp khác?

Mặc dù bệnh lao đã được kiểm soát ở nhiều quốc gia, thách thức do sự gia tăng các chủng lao kháng thuốc vẫn còn tồn tại; trong bối cảnh đó, xét nghiệm Line Probe Assay (LPA) được xem là một phương pháp hiệu quả trong phát hiện nhanh lao kháng thuốc. Kết quả xét nghiệm sẽ ảnh hưởng tích cực đến quá trình ra quyết định điều trị cho bệnh nhân lao, nhờ nó mà việc chẩn đoán sẽ được tiết kiệm thời gian và bắt đầu điều trị đúng. Vậy cụ thể xét nghiệm LPA là gì cũng như nguyên lý hoạt động của nó ra sao? Mời bạn đọc cùng theo dõi bài viết dưới đây.

Xét nghiệm LPA là gì? Nguyên lý hoạt động của nó

Xét nghiệm LPA (Line Probe Assay) là một kỹ thuật phân tử nhanh dựa trên phản ứng chuỗi polymerase (PCR) kết hợp với lai DNA trên dải để phát hiện vi khuẩn Mycobacterium tuberculosis và khả năng kháng thuốc chống lao. LPA phát hiện khả năng kháng Rifampicin (R), Isoniazid (H), Fluroquinolones (FQ), (Ofloxacin, Ofx; Levofloxacin, Lfx; Moxifloxacin), thuốc tiêm bậc hai (SLI), thuốc (Kanamycin, Km; Amikacin, Am).

Nguyên lý của xét nghiệm LPA là: Nó sử dụng mô hình liên kết của bộ khuếch đại DNA với đầu dò mục tiêu, với các vị trí đột biến ở cột 1 và 2 gây ra tình trạng kháng thuốc. Các đột biến được phát hiện thông qua sự lai của sản phẩm khuếch đại DNA với các đầu dò đột biến (MUT), nhằm nhận diện những đột biến phổ biến liên quan đến kháng thuốc kháng lao, đồng thời so sánh với các đầu dò nhắm vào trình tự DNA kiểu hoang dã (wild-type, WT) tương ứng.

Các thử nghiệm thăm dò đã được Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) phê duyệt để phát hiện nhanh tình trạng kháng thuốc bậc một và bậc hai. Những kỹ thuật này có thể được kiểm tra bằng cách sử dụng mẫu cấy (xét nghiệm gián tiếp và xét nghiệm âm tính hoặc dương tính). Công nghệ này nhằm mục đích nâng cao độ nhạy của việc phát hiện MTB (so với các phương pháp khác) đồng thời phát hiện bệnh lao kháng rifampicin (Rif) và isoniazid (H). Ngoài ra, đây là bộ kit thương mại đầu tiên phát hiện bệnh lao kháng thuốc thế hệ thứ hai và các đột biến liên quan đến đề kháng với fluoroquinolones và các thuốc thế hệ thứ hai (capreomycin, amikacin, kanamycin).

Xét nghiệm LPA phát hiện tính kháng thuốc của vi khuẩn lao

Tổ chức Y tế Thế giới khuyến cáo rằng tiêu chuẩn để điều trị bệnh lao kháng thuốc (lao đa kháng thuốc/lao siêu kháng thuốc) là dựa trên kết quả xét nghiệm đánh giá tính nhạy cảm với thuốc kháng lao để đánh giá tính nhạy cảm của chủng M.TB với các loại thuốc thông dụng. Điều này rất tốn thời gian vì nó cho ra kết quả khá chậm từ 25 ngày đến hơn 2 tháng. Vì vậy, việc điều trị cho bệnh nhân có thể bị trì hoãn, làm tăng nguy cơ thất bại điều trị và khó kiểm soát sự lây lan.

Kỹ thuật xét nghiệm LPA được phát triển để khắc phục các vấn đề trên. Xét nghiệm LPA dùng để chẩn đoán bệnh lao kháng thuốc bao gồm: Mycobacterium tuberculosis (MTB) đa kháng LPA. Bệnh lao đa kháng thuốc là một chủng Mycobacteria có khả năng kháng ít nhất hai loại thuốc trị lao hàng đầu là isoniazid (INH) và rifampicin (RIF). Chỉ định để chẩn đoán bệnh lao đa kháng thuốc. Có mẫu bệnh phẩm là chất nhầy, dịch phế quản, tràn dịch màng phổi, hút khí quản. Các chủng vi khuẩn nuôi cấy trên môi trường lỏng/rắn.

Ngoài ra, Mycobacteria lao (MTB) có khả năng kháng LPA cao. Bệnh lao siêu kháng là một chủng Mycobacteria lao đa kháng thuốc, có khả năng kháng thêm một trong các loại thuốc bậc hai của nhóm fluoroquinolone và bất kỳ một trong ba loại thuốc tiêm bậc hai như capreomycin, amikacin và kanamycin (kháng chính). Có chỉ định trong việc chẩn đoán bệnh lao siêu kháng thuốc (hoặc đồng thời với bệnh lao đa kháng thuốc). Mẫu bệnh phẩm bao gồm: Đờm AFB dương tính (với các mức độ 1+, 2+, 3+). Các chủng vi khuẩn nuôi cấy trên môi trường lỏng/rắn.

Xét nghiệm LPA có ưu điểm gì so với các xét nghiệm khác?

Mặc dù bệnh lao đã giảm dần trong những năm gần đây nhưng tỷ lệ mắc bệnh lao kháng thuốc ngày càng tăng đã trở thành trở ngại lớn cho nỗ lực kiểm soát bệnh lao. Hiện nay, các phương pháp được sử dụng để chẩn đoán bệnh lao kháng thuốc là:

• Nuôi cấy vi khuẩn: Nuôi cấy MTB trong hệ thống nuôi cấy tự động/lỏng và xét nghiệm độ nhạy cảm với thuốc truyền thống là quy trình tốn nhiều thời gian (tới 8 - 12 tuần), tỷ lệ ô nhiễm cao, đòi hỏi trang thiết bị, dụng cụ hiện đại và nhân lực phù hợp. kiến thức. Trình độ chuyên môn kỹ thuật chuyên nghiệp.
• Genexpert MTB: Phát hiện vi khuẩn lao Mycobacteria có kháng chỉ 1 loại thuốc là rifampicin (thuốc điều trị lao bậc 1).

So với các phương pháp trên, xét nghiệm LPA vượt trội hơn vì những lý do sau:

• Thời gian xử lý LPA là 24-48 giờ, nhưng nuôi cấy mất 6-8 tuần.
• Có thể thực hiện trực tiếp trên mẫu đờm (AFB dương tính), nhờ đó giải quyết được vấn đề về thời gian so với nuôi cấy.
• Độ đặc hiệu đối với Mycobacteria tubercus (MTB) được duy trì ngay cả trong các mẫu bị nhiễm các hạt khác.

Ưu điểm của xét nghiệm LPA so với các phương pháp khác có thể nói là:

• Việc chẩn đoán và điều trị kịp thời: Những bệnh nhân kháng thuốc có thể mang lại hiệu quả về mặt chi phí về lâu dài, vì số ca mắc mới sẽ tiếp tục giảm, từ đó giảm bớt gánh nặng tài chính cho chính phủ trong việc điều trị.
• Độ nhạy, độ đặc hiệu cao: Độ nhạy phát hiện rifampicin, isoniazid và đa kháng thuốc lần lượt là 98,1, 92,1 và 95%, độ đặc hiệu phát hiện rifampicin là 97,8% và lao kháng thuốc cao là 98,33%.

Ngoài ra, nó còn có thêm lợi ích là cho phép nghiên cứu các mô hình đột biến.

Hy vọng những thông tin trong bài viết đã giúp bạn đọc hiểu được xét nghiệm LPA là gì cũng như tầm quan trọng của nó trong việc chẩn đoán bệnh lao kháng thuốc. Có thể thấy rằng, với đặc tính hiệu suất cao và thời gian quay vòng ngắn khiến xét nghiệm LPA trở thành công cụ chẩn đoán hiệu quả, giúp chẩn đoán sớm và chính xác.